血涂片的制備方法
血涂片的制備方法很多,如手工推片法、自動推片法、載(蓋)玻片壓拉法、旋轉涂片法、棕黃層(buffy-coat)涂片法及厚血膜涂片法等,現介紹如下。
1、手工推片法 取血標本一滴置載玻片的一端,以邊緣平滑的推片一端,從血滴前沿方向接觸血液,使血液沿推片散開,推片與載玻片保持25~30o的平面夾角,平穩地將血向前推動,血液即在載玻片上形成一薄層血膜。將制成的血膜在空氣中揮動,使迅速干燥,以免血細胞皺縮。
一張良好的涂片,要求厚薄適宜,頭體尾分明,邊緣整齊,兩側應留有空隙。玻片的一端應留有貼標簽的地方。涂片的好壞與血滴大小、推片與載片之間角度、推片時的速度有關。血滴大、角度大、速度快,則血膜厚;反之則血膜薄。血膜分布不勻,主要是推片邊緣不齊、用力不勻或載玻片不清潔所致。
2、載玻片壓拉法 取兩張貼有標簽的載玻片備用,將血液滴于一張載玻片的近中央處,立即將另一載玻片于之貼合,四角對齊,標簽一端一個,使貼合后的玻片間留下如標簽一樣厚的間距。先將血滴沿縱向輕壓展開,再將兩玻片橫向均勻拉開,得到兩張血膜。此法最適用于血細胞的活體染色,預先將染料滴加在玻片上,干燥后備用。涂制時先將血液與染料混染一段時間,再按上述方法制成血涂片,顯微鏡下檢查,如網織紅細胞的檢驗。
3、旋轉器涂片法 旋轉涂片器的基本結構是:在與電動機轉軸垂直的方向裝一水平轉盤,正中夾置載玻片。徐制時將血標本滴加在載玻片的中央,開動旋轉涂片機,在規定的時間內即可制備一張良好的血涂片。對該儀器的要求應具有低慣性高轉矩,開動時能立即加速(5000r/min),關機時能迅速停止(O、25s內)。使用這種儀器涂片,白細胞及紅細胞能均勻分布在玻片上,且形態保持完好。
4、棕黃層涂片法為了獲得較多的有核細胞,使用離心的方法,將 EDTA 抗凝血作分層離心(RCF—2260g,5min),取紅細胞層上的棕黃層(有核細胞和血小板集中層,)作標本,用手工推制成涂片供檢查用。
5、厚血膜涂片法從指尖或耳垂取血1滴(約20ul)于載玻片中央,用推片的一角將血由內向外旋轉涂布,制成厚薄均勻、直徑約1、5cm的圓形血膜,自然干燥后,滴加數滴蒸餾水,使紅細胞溶解,脫去血紅蛋白。傾去水后血膜呈灰白色,干后染色鏡檢。厚血膜片因取血量多,待檢成分較集中,因此特別適合于瘧原蟲、絲蟲的微絲蚴等的檢查。
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